Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的每一次中逐渐扩展

从第一次消失口内自身抗原到消失1DF冠心病诊疗病征的方面率在幼儿时期就有很好的详细描述，多个口内自身抗原乙DF肝炎的幼儿中的有70%在血清也就是说后10年内患上冠心病，而随访15年的幼儿这一%-增高到84%。相相当之下，分之一诊疗1DF冠心病一半以上的DF1DF冠心病的病症机制还没给与必要的数据处理。

日渐多的人开始采用分期系统来定义1DF冠心病的方面：形态在消失多种口内自身抗原时重回第1阶段性，消失血糖异常时重回第2阶段性，消失病征时重回第3阶段性。一些多发口内自身抗原乙DF肝炎的形态，在1期和2期，方面快速，并发展为病症的1DF冠心病。我们前详细描述了一四组在首次检测到多种口内自身抗原抽样后大概10年无冠心病的极慢方面者，这四组病患人数少，但不同之处比较明确。随后，我们见到口内自身肝细胞特异性CD8+T细胞内中间体在方面快速的病患中的基本不共存，但在未来会病症和长期共存的冠心病病患中的很难以检测到。这可能表明，与方面病患相相当，这些病患自身免疫中间体的抑制增强。

一时期数据处理表明，尽管抑制性T细胞内(Treg)数量短时间，但冠心病病患共存一些动态毛病，其中的还包括对IL-2的中间体能力减缓。此外，冠心病病患中的的现像CD4+T细胞内可能对抑制不具抵抗性，表现为现像T细胞内的依赖性消退，自然消除的Treg和游离消除的其会Treg，以及肝细胞经历的CD4+T细胞内中的IL-2中间体消退。本数据处理的意在是详细描述了CD4+抑制性T细胞内(Treg)在一个大极快速方面者中的的不同之处，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

分析方法：BOX数据处理是一项以人群为了将的侧向数据处理，在21岁不限确诊的病患亲属中的检查1DF冠心病的危险原因。我们前详细描述了长期快速方面者的不同之处，他们保持多重口内自身抗原乙DF肝炎超过10年，但没消失冠心病的诊疗病征，慢性或非顺利进行性自身免疫。随后，10名继续保持无冠心病并愿意提供大量血液抽样的快速方面者确立T和B细胞内动态分析。在目前的数据处理中的，8名慢方面者(SP四组)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的口内自身抗原乙DF肝炎。所有的大多数人都处于1DF冠心病方面的1期，尽管一些人随后失去了口内自身抗原对某些肝细胞的乙DF肝炎中间体，然而，一名病患已经处于2期大概6年，但没消失诊疗病征，一名病患被诊断为冠心病，该病患72岁，在采集实验抽样时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据处理中的对该NAD顺利进行了基本上审核。分离单单来外周血单个核细胞内(PBMCs)，采用多参数流式细胞内绝技和T细胞内依赖性试验审核NAD中的Treg的基频、表现DF和动态。采用FlowSOM和CITRUS(聚类断定、表征和回归)顺利进行无监督聚类分析，审核Treg表现DF。

结果：与卫生NAD相相当，来自慢方面体的清醒CD4+T细胞内的监督聚类推断，酪氨酸的清醒CD4+ Treg基频增高，与利尿剂其会的TNFR相关受体(GITR)理解增高有关。一名HbA1c增大的病患与方面快速者和也就是说的对照四组相相当，Treg谱有所不同。动态已经有，与卫生NAD相相当，来自快速方面体的Treg激活的CD4+现像T细胞内依赖性明显损害。表现为对现像CD4+T细胞内CD25和CD134理解的依赖性增高。

布1 深入的表现DF分析推断，CD4+Treg亚DF在慢方面缓冲区中的增高。由FlowSOM分解的Treg室，聚集在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据标有物理解断定单单10个元簇:清醒T细胞内_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T细胞内;HLA-DR + GITR +清醒T细胞内;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)采用9个不同Treg标有分解的10个元簇的MST。每个路由器代表者一个集群(100个集群)，更大的元集群(10个元集群)在路由器四组周围上色。每个路由器中的的饼布表示单个标有的理解等级。(b)每个元聚类的热布，以推断整体标有理解。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)分解布，以及FlowSOM识别的每个元簇的很薄。(e-l)正因如此数量级为每个metacluster盒线或布(数量级> 0.05%)确定为HD和SP四组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T细胞内(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T细胞内(l)。紫色左上方代表者捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对小写秩检验。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 采用CITRUS的预测模DF确认，Treg基频的增高是方面快速的标志。AO门控(a - f)和柑橘分析(g-k)相当SP大多数人和也就是说的HD大多数人在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会性的代表者性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3钼，然后通过HLA-DR和GITR理解顺利进行分离单单来，模拟器FlowSOM社会性。(b) HD(环纹)和SP(黑斑)四组以及NADSP 606(紫色)中的CD25+ cd127的基频简介布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的盒线或布;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度着色，箭头突单单的簇被识别为SP和HD缓冲区二者之间的不同。(j)盒线或布推断了在SP(黑斑)和HD(灰点)四组中的，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的正因如此数量级(%-)。(k)直方布推断每个簇的表现DF(粉红色)和Treg标有正因如此理解与文化背景理解(蓝色);上列，缓存Treg_3;下面一行，缓存Treg_4。文化背景与所有其他簇中的标有的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对小写秩检验

布3 与卫生献血者相相当，方面快速者清醒treg的GITR增高。每个清醒CD4+T细胞内元簇(清醒T细胞内_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T细胞内;HLA-DR + GITR +清醒T细胞内;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个理解标有的转变。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的理解热布(sp606不还包括在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR理解串联，推断直方布(c)和简介布(d)。Wilcoxon配对小写秩和检验，p< 0.07(紫色)所有NAD还包括，p< 0.05(蓝色)NADSP 606和也就是说的HD不还包括在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR理解，从AO门控，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(紫色)串联，推断直方布(e)和简介布(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对小写秩检验

布4 来自快速方面的CD4+ treg细胞内掌控现像CD4+T细胞内的能力减缓。SP四组用蓝色的线或和左上方表示，HD四组用黑色的线或和左上方表示，紫色的线或/左上方表示NADsp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利进行分选。CD4+CD25−(此番者)被标有为CFSE, Treg按观察的%-滴定。用抗CD3 /28微珠重置细胞内，人才培养3几天后顺利进行流式细胞内绝技检测。(a-d)与CD4+此番者正因如此应该的treg人才培养(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者人才培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE依赖性百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性百份。采用乙DF肝炎对照(酪氨酸的响应该细胞内都有treg)近似值依赖性百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

布5 现像CD4+T细胞内对快速方面的T细胞内重置的依赖性更尖锐。SP四组用蓝色的线或和左上方表示，HD四组用黑色的线或和左上方表示，紫色的线或/左上方表示NADsp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利进行分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标有，treg按观察的%-滴定。用抗CD3 /28微珠重置细胞内，人才培养3几天后顺利进行流式细胞内绝技(CD25反染)和细胞内因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同人才培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE依赖性花红(b)。(c,d) CD25依赖性花红(c)和CD134依赖性花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养中的的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

结论：我们得单单的结论是，来自快速方面子的重置清醒CD4+Treg在GITR理解中的给与了扩展和比较丰富，重申了进一步数据处理Treg在1DF冠心病风险形态中的的异质性的合理性。

原文单单处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28