Diabetologia：激活但功能毁坏的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出家兔自身特异性到显现出1改进型冠心病针灸副作用的令人满意率在婴幼儿时期就有很好的阐述，多个家兔自身特异性阳性的婴幼儿之前有70%在血清转换后10年内入院冠心病，而随访15年的婴幼儿这一人口比例降低到84%。正因如此，占针灸1改进型冠心病一半以上的改进型1改进型冠心病的病症机制还没有得到适当的科学研究。

越来越多的人开始用作有系统系统来定义1改进型冠心病的令人满意：个体在显现出多种家兔自身特异性时转入第1过渡期，显现出食欲异常时转入第2过渡期，显现出副作用时转入第3过渡期。一些多发家兔自身特异性阳性的个体，在1期和2期，令人满意亦然快，并发展为病症的1改进型冠心病。我们之前阐述了一四组在首次检测到多种家兔自身特异性取样后大概10年无冠心病的亦然很慢令人满意者，这四组病患人数少，但特征非常明确。随后，我们发掘出家兔自身抗原特异性CD8+T细胞氘反不宜会在令人满意较快的病患之前基本不存在，但在近期病症和长期存在的冠心病病患之前很容易检测到。这可能声称，与令人满意病患远比，这些病患化脓性反不宜会的调节增强。

早期科学研究声称，尽管调节性T细胞氘(Treg)数量正常人，但冠心病病患存在一些功能缺陷，其之前包括对IL-2的反不宜会能力也降低。此外，冠心病病患之前的振荡CD4+T细胞氘可能对调节格外具抵抗性，表现为振荡T细胞氘的减缓减很慢，纯净转化成的Treg和体外转化成的诱导Treg，以及抗原年中的CD4+T细胞氘之前IL-2反不宜会减很慢。本科学研究的目的是阐述了CD4+调节性T细胞氘(Treg)在一小群亦然较快令人满意者之前的特征，他们的总数为43岁(31-72岁)，随访时间段为18-32年。

方法：BOX科学研究是一项以成年人基础上的纵向科学研究，在21岁所列住院的病患亲属之前定期检查1改进型冠心病的危险环境因素。我们之前阐述了长期较快令人满意者的特征，他们持续保持多重家兔自身特异性阳性有约10年，但没有显现出冠心病的针灸副作用，很慢性或非进行时性化脓性。随后，10名继续持续保持无冠心病并愿意提供大量血液取样的较快令人满意者扩展到T和B细胞氘功能统计分析。在目前的科学研究之前，8名很慢令人满意者(SP四组)，之前位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的家兔自身特异性阳性。所有的举例来说都处于1改进型冠心病令人满意的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身特异性对某些抗原的阳性反不宜会，然而，一名病患已经处于2期大概6年，但没有显现出针灸副作用，一名病患被诊断为冠心病，该受试者72岁，在采集实验者取样时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析之前对该NADPH进行时了单独评估。分开外周血单个氘细胞氘(PBMCs)，采用多参数流式细胞氘拳法和T细胞氘减缓试验评估NADPH之前Treg的频率、表改进型和功能。用作FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)进行时无监督聚类统计分析，评估Treg表改进型。

结果：与身体健康NADPH远比，来自很慢令人满意体的思绪CD4+T细胞氘的监督聚类推测，激活的思绪CD4+ Treg频率降低，与抑制作用诱导的TNFR相关蛋白(GITR)理解降低有关。一名HbA1c急剧下降的病患与令人满意较快者和意味着的对照四组远比，Treg对光大同小异。功能统计分析声称，与身体健康NADPH远比，来自较快令人满意体的Treg介导的CD4+振荡T细胞氘减缓明显受损。表现为对振荡CD4+T细胞氘CD25和CD134理解的减缓降低。

示意图1 深入的表改进型统计分析推测，CD4+Treg亚改进型在很慢令人满意队列之前降低。由FlowSOM降解的Treg室，聚集在来自所有NADPH的活CD4+CD45RA -细胞氘上。根据标示出物理解鉴定出10个元簇:思绪T细胞氘_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T细胞氘;HLA-DR + GITR +思绪T细胞氘;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)用作9个多种不同Treg标示出降解的10个元簇的MST。每个端口都有一个一个大(100个一个大)，格外大的元一个大(10个元一个大)在端口四组外围成品。每个端口之前的饼示意图指出单个标示出的理解级别。(b)每个元聚类的热示意图，以推测全面性标示出理解。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)降解示意图，以及FlowSOM比对的每个元簇的覆盖层。(e-l)比较总质量为每个metacluster装示意示意图(总质量> 0.05%)相符为HD和SP四组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T细胞氘(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T细胞氘(l)。绿色红色都有人口为120人SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 用作CITRUS的预测模改进型证实，Treg频率的降低是令人满意较快的标志。分级门控(a - f)和柑橘统计分析(g-k)比较SP举例来说和意味着的HD举例来说在CD4+CD45RA−T细胞氘上的歧异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的都有性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR理解进行时分开，模拟FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(杂色)四组以及NADPHSP 606(绿色)之前CD25+ cd127的频率汇总示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控闭包的装示意示意图;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度着色，红色凸显的簇被比对为SP和HD队列之间的多种不同。(j)装示意示意图推测了在SP(杂色)和HD(灰点)四组之前，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的比较总质量(人口比例)。(k)直方示意图推测每个簇的表改进型(黑色)和Treg标示出比较理解与历史背景理解(深蓝色);上列，闪存Treg_3;示意示意图悄悄，闪存Treg_4。历史背景与所有其他簇之前标示出的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

示意图3 与身体健康献血者远比，令人满意较快者思绪treg的GITR降低。每个思绪CD4+T细胞氘元簇(思绪T细胞氘_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T细胞氘;HLA-DR + GITR +思绪T细胞氘;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个理解标示出的变异。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的理解热示意图(sp606不包括在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇之前所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR理解串联，推测直方示意图(c)和汇总示意图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(绿色)所有NADPH包括，p< 0.05(深蓝色)NADPHSP 606和意味着的HD不包括在测试之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之前GITR理解，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(绿色)串联，推测直方示意图(e)和汇总示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

示意图4 来自较快令人满意的CD4+ treg细胞氘控制振荡CD4+T细胞氘的能力也降低。SP四组用深蓝色的支线和红色指出，HD四组用黑色的支线和红色指出，绿色的支线/红色指出NADPHsp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞氘进行时分选。CD4+CD25−(不宜答者)被标示出为CFSE, Treg按观察的人口比例氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠重置细胞氘，培养3天后进行时流式细胞氘拳法检测。(a-d)与CD4+不宜答者比较不宜的treg培养(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD不宜答者培养。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE减缓一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓一般而言。用作阳性对照(激活的响不宜细胞氘含treg)量度减缓一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 振荡CD4+T细胞氘对较快令人满意的T细胞氘重置的减缓格外亦然端。SP四组用深蓝色的支线和红色指出，HD四组用黑色的支线和红色指出，绿色的支线/红色指出NADPHsp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞氘进行时分选。CD4+CD25−(不宜答者)被cfsel标示出，treg按观察的人口比例氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠重置细胞氘，培养3天后进行时流式细胞氘拳法(CD25反染)和细胞氘因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606不宜答者共同培养。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE减缓一般而言(b)。(c,d) CD25减缓一般而言(c)和CD134减缓一般而言(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养之前的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

推论：我们得出的推论是，来自较快令人满意子的重置思绪CD4+Treg在GITR理解之前得到了扩展和多样化，强调了进一步科学研究Treg在1改进型冠心病风险个体之前的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28